服务介绍

免疫荧光技术服务   

       免疫荧光技术服务（Immunofluorescence technique）又称免疫荧光抗体染色，是标记免疫技术中发展早的一种。它是基于免疫学、生物化学和显微镜技术建立起来的一项技术。由于抗原-抗体反应具有高度的特异性，我们不仅能够看到待测样本中目的蛋白的位置，同时也能通过荧光的强度推测反应蛋白的含量。如果使用两种以上的抗体进行染色，我们可以观察到多种蛋白在组织中的分布，以及相互作用关系等。用于标记蛋白的荧光素主要有异硫氰酸荧光黄（FITC），四乙基罗丹明（RB200）和四甲基异硫氰酸罗丹明（TMRITC）。

      直接染色法：

      将标记的特异荧光抗体直接滴加在抗原标本上，经过一定时间的染色。洗去多余的荧光抗体，在荧光显微镜下便可以观察到由于抗原抗体结合而发出的荧光。此方法操作简单，实验流程短。缺点是：一种标记抗体只能检测一种抗原，敏感性略差，使用此方法应设置阳性和阴性对照。

      间接染色法：

      使用此方法检测的时候，先用未标记的一抗与抗原标本进行反应，反应一段时间后洗去多余抗体，再使用标记有荧光的二抗抗体与一抗反应。如果第一步中的抗原和抗体互相反应，则会形成抗原-一抗-二抗的复合物，再洗去未反应的标记抗体，在荧光显微镜下便能够看到荧光。

服务内容

      1.已转染72h的细胞种于共聚焦专用培养皿里，预冷PBS洗三遍，每次5分钟；

      2. 细胞半干时，覆盖以4%冷的多聚甲醛固定15分钟，避光；

      3.吸去多聚甲醛后，用预冷PBS洗三遍，每次5分钟；

      4. 0.5% Triton X-100覆盖细胞10分钟，预冷PBS洗三遍，每次5分钟；

      5. 与二抗相同宿主的血清室温封闭30分钟；

      6. 配制一抗：SAB + FBS = 1:200；

      7.加入一抗覆盖细胞，锡纸包裹4℃避光过夜；

      8.取出细胞复温至室温约1 h；

      9.冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床；

      10.配制荧光标记二抗：用FBS配制，浓度1:200；  

      11.加入二抗，室温孵育1小时，避光；

      12. 冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床；

      13.DAPI染核，每皿1滴，完全覆盖住细胞即可；

      14. 冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床；

      15.加入防荧光淬灭封片剂封片，避光；

      16.上机confocol。

服务说明

      1. 签订实验协议；

      2. 客户提供：

        1） 客户可以提供已经制备但未做进一步处理的细胞爬片、石蜡切片、冰冻切片等；

        2） 客户可以提供组织样品，委托我们完成样品切片的制备；

        3）客户可以自行提供抗体，也可使用公司抗体库中抗体。

      3. 实验周期及服务费用因样品的数量而改变，具体详询本公司。

质量承诺

      1．返还未使用的客户提供的抗体；

      2．真实的实验原始数据；

      3．权威的检测报告；

      4．详细完整的实验流程。