服务介绍

荧光素酶报告基因分析    

       Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

服务内容

      1. 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。

      2. 设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。

      3. 筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。

      4. 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。

      5. 培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。

      6. 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。

      7. 提取蛋白并用于荧光素酶检测。

      8. 加入底物，测定荧光素酶的活性。

      9. 计算相对荧光强度，并与空载对照比较。

服务说明

      1.客户提供：含有荧光素酶报告基因的重组质粒（如需公司提供请说明）。

      2.服务周期：3-4周

      3.若另有疑问请致电本公司咨询，我们将竭诚为您服务。

质量承诺

      1.权威的鉴定报告；

      2.原始的实验数据；

      3.详细的实验步骤。